3،3'،5،5'-تيتراميثيل بنزيدين ثنائي هيدروكلوريد هيدرات هو ركيزة كروموفور في اختبارات ELISA. وهو بديل غير مسرطن للبنزيدين. شكل قابل للذوبان في الماء من TMB لتحديد البيروكسيداز. كما تم استخدام 3،3'،5،5'-تيتراميثيل بنزيدين ثنائي هيدروكلوريد هيدرات كركيزة لبيروكسيداز الفجل الحار في اختبار الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم واختبار النقطة العكسية (RDB). TMB هو أمين عطري يخضع للأكسدة بواسطة حالات الأكسدة الأعلى للبيروكسيدازات الهيمية (المركبات I و II) مما يجعله ركيزة مختزلة مساعدة. تؤدي أكسدة إلكترون واحد من TMB إلى تكوين كاتيون جذري يشكل معقد نقل شحنة مع المركب غير المؤكسد. يمتص هذا المعقد نقل الشحنة عند 652 نانومتر (ε = 39،000). الشكل المؤكسد بالكامل (ثنائي الإيمين) يمتص عند 450 نانومتر (ε = 59،000) ويتكون من أكسدة إلكترونين متتاليين لـ TMB. وبالتالي فإن نسبة الأكسدة هي 0.5 مول من معقد نقل الشحنة (λmax = 652 نانومتر) أو 1 مول من ثنائي الإيمين (λmax = 450 نانومتر) يتكون (أو TMB المؤكسد) لكل مول من الهيدروبيروكسيد الذي يتم اختزاله بواسطة البيروكسيداز. 3،3'،5،5'-تيتراميثيل بنزيدين ثنائي هيدروكلوريد هيدرات (TMB-d) هو ركيزة كروموجين حساسة للبيروكسيداز. وهو غير مسرطن، وبالتالي يمكن استخدامه كبديل آمن للبنزيدين. TMB-d مفيد في قياس الهيموغلوبين وفي تلوين الحبيبات المحتوية على المايلوبيروكسيداز في الخلايا المحببة.