ملاحظة: يجب تنشيط PTAD-Alkyne أولاً عن طريق التقليب بنسبة مولارية 1:0.98 مع 1،3-ثنائي برومو-5،5-ثنائي ميثيل هايدانتوين (المنتج رقم 157902). يصبح التنشيط واضحًا عند تغير لون المحلول من عديم اللون إلى الأحمر العميق ويجب استخدام الكاشف المنشط فورًا. الإجراء العام لتعديل البروتين باستخدام PTAD. الجزء 1: تنشيط PTAD اخلط معًا ما يعادل 1:0.98 مولار من PTAD غير المنشط مع 1،3-ثنائي برومو-5،5-ثنائي ميثيل هايدانتوين (المنتج رقم 157902) في مذيب عضوي (المذيبات المفضلة هي DMF أو أسيتونيتريل؛ تجنب استخدام DMSO). يتم ملاحظة تغير اللون من عديم اللون/أصفر باهت إلى الأحمر العميق (حوالي 5 دقائق من الخلط). بعد أن يتحول المحلول إلى اللون الأحمر، قم بتخزين الكاشف المنشط الآن على الثلج واستخدمه لتعديل البروتين في غضون 30 دقيقة. الجزء 2: تعديل البروتين أضف محلول البروتين في مخزن فوسفات/تريس المختلط أو مخزن التريس (يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني بين 6 - 9) إلى أنبوب إيبندورف (أو وعاء آخر) يحتوي على كاشف PTAD المنشط المحضر أعلاه واخلط بلطف في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى 30 دقيقة. يُفضل استخدام فائض مولاري يبلغ 10 أضعاف الكاشف بالنسبة للبروتين. استخدم البروتين بتركيز لا يقل عن 1 مجم/مل (التركيزات الأعلى مفضلة لتعزيز الوسم). قم بإزالة PTAD غير المتفاعل الزائد عن طريق الترشيح الهلامي. PTAD-Alkyne هو كاشف اقتران حيوي انتقائي لتعديل بقايا التيروزين مع ألكاين طرفي. يمكن بعد ذلك إجراء التعديل اللاحق عبر تفاعل كيمياء النقر المحفز بالنحاس بين الأزيد/الألكاين مع مركب أو جزيء حيوي يحتوي على أزيد. وقد أظهر هذا الكاشف قدرته على إدخال سلاسل بولي إيثيلين جليكول أو PEG بشكل انتقائي على البروتينات ذات بقايا التيروزين المكشوفة على السطح. كما تم استخدام PTAD-Alkyne في تكوين مترافقات الأجسام المضادة-العقاقير. هذا الكاشف متوافق مع أنظمة المخازن المختلفة مثل PBS وتريس ومخزن PBS/تريس المختلط (المفضل). وقد ثبت أن الرابطة مع التيروزين مستقرة تجاه درجات الحموضة ودرجات الحرارة القصوى وكذلك بلازما الدم.