حمض الديهيدروفوليك هو وسيط في تحويل حمض الفوليك الغذائي إلى تتراهيدروفولات بواسطة إنزيم اختزال الديهيدروفولات (DHFR) في الثدييات. يعمل كترياق لسمية الميثوتريكسات وهو مركب أساسي في المسارات الأيضية لتخليق النيوكليوتيدات والأحماض الأمينية. في البكتيريا، يتم توليده من 7،8-ديهيدروبتيروات بواسطة إنزيم سينثاز الديهيدروفولات.