ريتونافير ينتمي إلى مجموعة مثبطات البروتياز، التي تمنع جزءًا من فيروس نقص المناعة البشرية يسمى البروتياز. يتضمن طريقة عمله الارتباط بموقع البروتياز النشط وتثبيط نشاط الإنزيم. يُستخدم ريتونافير بالاشتراك مع عوامل مضادة للفيروسات القهقرية الأخرى لعلاج المرضى المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول. ريتونافير هو مثبط لبروتياز فيروس نقص المناعة البشرية (EC50 = 25 نانومولار) والذي يثبط أيضًا CYP3A4، وهو الشكل الأساسي لسيتوكروم P450 الذي يستقلب مثبطات البروتياز. من خلال تثبيط CYP3A4، يمكن للجرعات المنخفضة من ريتونافير أن تقلل من استقلاب مثبطات البروتياز المأخوذة بالتزامن، مما يعزز توافرها الحيوي وفعاليتها.