تي4 DNA ليغاز هو إنزيم مشتق من العاثية T4 التي تصيب بكتيريا الإشريكية القولونية. يشكل رابطة فوسفوديستر معتمدة على الطاقة بين نهايات متعددة النوكليوتيدات المتجاورة لـ DNA مزدوج الشريط. يُستخدم في البيولوجيا الجزيئية والهندسة الوراثية لتحفيز تكوين روابط فوسفوديستر بين النهايات 3'-هيدروكسيل و5'-فوسفات في DNA مزدوج الشريط، وإغلاق الشقوق أحادية الشريط في DNA مزدوج الشريط. يتم توفيره مع محلول تخزين مركز 10x يحتوي على ATP.